Реферат: Кодирующая ДНК гена анионной пероксидазы табака (ТОР) была клонирована в вектор рЕТ40b. Проблема "редких" для прокариот кодонов AGA и AGG (кодируют остаток аргинина) была решена путем использования штамма Escherichia coli BL21 (DE3) Codon Plus. Уровень экспрессии апобелка пероксидазы табака в выбранном штамме составил более 40% общего белка. Оптимизация процедуры рефолдинга пероксидазы табака была проведена на основе известной методики рефолдинга рекомбинантной пероксидазы хрена. Выход реактивации рекомбинантной пероксидазы табака составляет 'ЭКВИВ'7%, удельная активность по АБТС - 1100-1200 ед. активности на 1 мг белка. Изучены зависимости скорости окисления АБТС перекисью водорода от концентрации субстратов в отсутствие и в присутствии 50 мМ Ca{2+}. Показано, что данная реакция, катализируемая рекомбинантной негликозилированной ТОР, протекает по механизму типа пинг-понг, причем в присутствии ионов кальция биомолекулярная константа скорости взаимодействия фермента с перекисью водорода уменьшается в 2-2,5 раза, а соответствующая константа для АБТС - в 1,5 раза. Таким образом, ионы кальция оказывают ингибирующее действие на рекомбинантную пероксидазу табака аналогично их действию на нативный фермент. Полученные данные свидетельствуют о том, что олигосахаридная часть молекулы природной пероксидазы табака не влияет на ее кинетические свойства и на взаимодействие с ионами кальция. Библ. 18

Библиографическая ссылка: Хушпульян Д.М. , Савицкий П.А. , Рожкова А.М. , Чубарь Т.А. , Фечина В.А. , Сахаров И.Ю. , Лагримини Л.М. , Тишков В.И. , Газарян И.Г.
Экспрессия анионной пероксидазы табака в клетках Escherichia coli и ее рефолдинг из телец включения
Биохимия. 2003. Т.68. №11. С.1480-1487. РЖ ВИНИТИ

Идентификаторы БД:

РЖ ВИНИТИ:

31 (FB01) 04.05-04Д3.160