Реферат: Методом полимеразной цепной реакции получены мутантные формы пероксидазы табака (TOP) Gln116Trp и Leu157Trp. Экспрессия этих мутантов была осуществлена путем клонирования в вектор рЕТ40b и культивированием в штамме Е. coli BL21(DE3) Codon Plus. Уровень экспрессии апобелка пероксидазы табака в выбранном штамме в обоих случаях составил более 40% общего белка. Процедура рефолдинга мутантных форм была проведена на основе известной методики рефолдинга рекомбинантной пероксидазы табака дикого типа. Выход реактивации мутантных форм пероксидазы табака составляет 3-9%, удельная активность по АБТС - 2000- 3000 ед. активности на 1 мг белка. Изучены зависимости скорости окисления АБТС перекисью водорода от концентрации субстратов. Показано, что данная реакция, катализируемая мутантными формами, протекает по механизму типа "пинг-понг", однако удельная активность по различным субстратам у Gln116Trp и Leu157Trp серьезно различается. Таким образом, можно сделать предположение, что остатки триптофана выступают в роли элемента в цепи передачи заряда между активным центром фермента и субстратом.

Библиографическая ссылка: Полозников А.А. , Савицкий П.А. , Хушпульян Д.М. , Чубарь Т.А. , Газарян И.Г. , Тишков В.И.
Получение и свойства мутантных форм пероксидазы табака с дополнительным остатком триптофана
Вестник Московского Университета. Серия 2: Химия. 2006. Т.47. №1. С.20-24. РИНЦ

Идентификаторы БД:

РИНЦ:

11665378